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江苏昆山检验检疫局雪松病菌快速检测技术通过鉴定

发布时间:2020-03-20 12:13:22 阅读: 来源:喷涂机厂家

由江苏昆山检验检疫局和南京农业大学共同申请的“雪松疫霉根腐病菌快速分子检测技术研究”课题日前通过专家鉴定。该研究以tRNA序列为靶点,首次应用于卵菌的鉴定,并建立了一套快速、灵敏、高效的基于PCR检测雪松疫霉根腐病菌的方法,该研究对从GenBank中得到teralis和其他疫霉种的tRNA序列进行分析,设计了一对特异性引物T1/T2,利用该引物对其他15种疫霉和其他真菌进行特异性扩增,发现只能从teralis中扩增得到一条192bp的条带,其他菌株均无扩增条带出现,表明该对引物具有种的特异性。

在25μL反应体系中,普通的PCR方法能检测到teralis基因组DNA,而该研究的体系中采用套式PCR技术将检测teralis基因组DNA的灵敏度提高到了1fg,效率提高了1万倍,这对于靶标病原物的量非常低或存在PCR抑制物时非常重要。这表明该研究设计的引物具有很高的灵敏度。对发病植株进行检测时,结合简单的DNA提取方法使用特异引物T1/T2进行PCR扩增,一个工作日就可以判断植物是否被teralis侵染。使用NaOH裂解法可以在30分钟之内即可得到病组织中病原菌的DNA用于PCR扩增,而使用传统的方法检测至少需要两周,检测时间大大缩短。

该研究建立的雪松疫霉根腐病菌检测方法具有准确、快速、简单易操作等优点,可以在病害侵染初期鉴定出病原物,可参考应用于出入境植物和植物产品的检验检疫及田间调查,对控制雪松疫霉根腐病菌传入我国具有重要意义。同时,该方法的建立也为其他病原菌的检测提供了技术指导和理论依据。

(纪睿)

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